苹果饥饿营销案例分析:加味天雄散治療釩中毒所致小鼠睾丸組織損害的實驗研究

加味天雄散治療釩中毒所致小鼠睾丸組織損害的實驗研究

文質君，陳筱春

(湘潭師范學院生物系，湖南湘潭411201)

　　摘要：目的：考察加味天雄散對釩中毒所致小鼠睾丸組織損害的治療作用。方法：以偏礬酸鈉(NaVO3)經腹腔注射給雄性小鼠染毒，6周后作造模檢查，証實引起睾丸組織明顯損傷后，用加味天雄散水劑灌胃治療，連續5周后取材，行睾丸組織學檢查、睾丸釩含量測定。結果：中藥治療組睾丸釩含量顯著低于模型組(P＜0.01)，与對照組無差异；曲細精管直徑、各級生精細胞、支持細胞、間質細胞數均与對照組無差异，而顯著高于模型組(P＜0.01)。結論：加味天雄散可修复釩中毒所致的睾丸組織損傷，恢复雄性生殖功能。
　　關鍵詞：加味天雄散；睾丸組織；雄性生殖

Experimental Study of Modified Tianxiong Power on Testis
Tissue of the Mice with Vanadium－ induced Testis Damages
Wen Zhijun, Chen Xiaochun
(Dept. of Biology Xiangtan Normal College, Xiangtan Hunan 411201)

　　Abstrac: Object: To observe the therapy effect of modified Tianxiong power on testis tissue of the mice with vanadiuminduced testis damages. Method: Male mice were contaminated by injecting with NaVO3 through abdominal cavity, and would take a model examination after six weeks. After being confirmed that the testis tissue had been significantly damaged,the mice were intragasted by hydrolytic reagent of modified Tianxiong power . To draw materials in the following five weeks, and have a examination of testis tissue and a vanadiumcontent determination of testis. Result: The vanadiumcontent of testis in treated group is significantly lower than that in model group(p＜0.01), but no difference with the control group; the diameter of spermiduct、 the number of permatogenic cells、 the marked cells、 the substance cells at all levels in the treated group are no difference with the control group too, but obviously higher than that in model group(p＜0.01).Conclusion: It indicated that the modified Tianxiong power can repair the testis tissue with vanadiuminduced damages, and can recover the function of male reproduction.
　　Key words: Modified Tianxiong power; Testis tissue; Male reproduction

　　工業化社會中，工業毒品引起的環境污染對作業工人健康的危害，多為人們所熟知。并采取了許多有效的手段保護環境及對多种職業病進行防治，從而有效地保証了工業發展、環境清洁及人類的健康。然而工業發展不斷地產生新問題，給職業病防治、環境保護及臨床流行病學提出了更高的要求和新的課題。
　　釩(Va)是自然界及生物体內分布較廣的一种金屬元素，被多种工業所應用，也是人体內必需的微量元素之一，是生物体中的一种內在調節物。近年來，釩使用量逐漸增加，有研究表明釩對人体皮膚、肺、大鼠腎臟、生殖系統都有不同程度的危害^{〔1，2，3〕}。在釩的生殖毒性研究中，有報道釩能使雌鼠受孕率和著床率下降，死胎率及畸胎率增高^〔4〕，雄鼠附睾液中精子數減少，畸形精子及死精子數量增多，且引起顯著的睾丸組織學改變^〔5，6〕。故影響睾丸机能可能是影響雄性生殖的主要原因。筆者對加味天雄散治療釩中毒所致小鼠睾丸組織損害進行了實驗研究，現報告如下。

1　材料与方法

1.1　實驗動物昆明种成年雄性小鼠60只，体重25.4±4.1g，由湖南中醫學院動物中心提供。
1.2　主要藥品NaVO3規格：AR，北京化工厂生產，用前加蒸餾水稀釋至所需濃度，高溫消毒30min備用。加味天雄散(配方：附子、肉桂、白術、龍骨、肉蓯蓉、巴戟天、韭子、淫羊藿、冬虫草)：用市售中藥配成，按重量加8倍水煎至300ml，過濾后再加6倍水煎至200ml，將兩次煎液混合濃縮至155ml備用。丙酸睾丸酮：市售注射劑，上海第九制藥厂生產，按体表面積比率折算等效劑量^〔7〕。沒食子酸：AR，廣州化學試劑厂生產。溴酸鉀：CP，上海試劑二厂生產。
1.3　實驗方法
1.3.1　分組与給藥方法隨机將60只小鼠分為4組：Ⅰ組為空白對照組，Ⅱ組為陽性對照組，Ⅲ組為中藥治療組，Ⅳ組為模型組。Ⅱ～Ⅳ組以NaVO₃3mg/kg体重經腹腔注射造模，每2天注射1次，按1ml/100g給藥；Ⅰ組注射等体積生理鹽水作空白對照，6周后，每組隨机抽5只小鼠進行造模檢驗。此后陽性對照組(Ⅱ組)每日經皮下注射丙酸睾丸酮1.6mg/kg。中藥治療組(Ⅲ組)以加味天雄散煎劑灌胃2.5ml/100g，相當于生藥3g，每天1次；模型組(Ⅳ組)和空白對照組(Ⅰ組)以等体積蒸餾水灌胃，空調間飼養，室溫22±1℃，自由飲食，連續35天之后進行取材、檢測。
1.3.2　睾丸組織學檢查取一側睾丸以10％的福爾馬林固定，石蜡包埋切片，H－E染色，用日本產Nikon生物顯微鏡，在低倍鏡下(X100)以測微尺測量15個完整圓形曲細精管直徑，取其均值。高倍鏡下(X400)選擇15個曲細精管計數各級生精細胞，結果取均值。
1.3.3　睾丸組織釩含量測定取另一側睾丸，稱重后加10倍体積去离子水進行勻漿、過濾，4000r/min离心5min，取上清液用催化分光光度法進行釩含量測定，具体操作見文獻^〔8〕。
1.3.4　血漿睾酮含量的測定小鼠全身肝素化后，斷尾取血0.5ml，3000r/min离心5min，分离血漿，用放射免疫法測定，由湖南中醫學院放射免疫中心檢測。

所得各項數据均采用方差(F檢驗)及組間兩兩比較(q檢驗)，如遇方差不齊，則采用中位數檢驗。

2　結果

2.1　造模檢驗睾丸組織學變化　結果見表1。
　　造模檢驗結果表明，NaVO₃3mg/kg經腹腔注射染毒6周后，睾丸組織學檢查Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組曲細精管直徑減小，各級生精細胞、支持細胞、間質細胞均減少(P<0.05或 P<0.01)，說明釩已經造成了對睾丸生精机能的損害，造模成功。

表1　NaVO3染毒6周后小鼠睾丸組織學檢查結果(X±SD，n=5)

注：与空白對照組比^※P<0.05，^※※P<0.01。

2.2　睾丸組織釩含量与睾酮含量的測定　結果見表2。
　　經方差分析和組間兩兩比較提示，模型組睾丸釩含量顯著升高(P<0.01)。血漿睾酮以雄激素治療組為高，与各組間有顯著差异(P<0.01)，可能与外源性睾丸酮干扰有關。但Ⅰ、Ⅱ、 Ⅲ組均高于模型組(P<0.01)。

2.3 加味天雄散治療后小鼠睾丸組織學檢查　結果見表3。
　　經方差分析及組間q檢驗，模型組曲細精管直徑顯著減小(P<0.01)，各級生精細胞、間質細胞、支持細胞均減小(P<0.05或 P<0.01)，而雄激素治療組及加味天雄散治療組各觀察值均接近空白對照組(P>0.05)。

3　討論

　　睾丸是体內釩的主要貯藏器官之一，本文測定睾丸組織釩含量，已顯示了染毒組与非染毒組的顯著差异。在這种高釩含量的睾丸組織中，曲細精管直徑變小、各級生精細胞、支持細胞及間質細胞均顯著減少。也許就是這种組織學上的變化，生精微環境不能維持，生精過程受到干扰；雄激素的合成受阻，使生殖細胞的分裂過程不能正常進行，因而影響了雄性生殖机能。

表2　睾丸釩含量与睾酮含量分析、比較

注：与空白對照組比^※※P<0.01；与模型組相比^△△P<0.01。

表3　加味天雄散治療后小鼠睾丸組織學各項指標檢查結果比較(X±SD,n=8)

注：与空白對照組比^※P<0.05，^※※P<0.01。

　　加味天雄散治療后，睾丸組織釩含量下降，曲細精管直徑、各級生精細胞、支持細胞和間質細胞數均得以恢复，說明加味天雄散能促進釩中毒所致的睾丸組織學損傷的修复，對釩中毒所致的雄性生殖机能障礙有肯定的治療效果。本方為補腎壯陽填精之經驗方，常用于腎陽虛所致的男性不育症治療〔9〕。以壯陽為主，佐以滋陰，益气健脾。根据這种診斷性治療結果，可以認為釩中毒所致的生殖机能障礙是腎陽虧虛的外在表現，釩中毒所致的睾丸組織學損害及生精微環境的破坏是腎陽虧虛的內在表現，是腎陽虛的物質基礎。綜上所述，加味天雄散通過大補腎陽而修复了睾丸組織的損害，為雄性生殖細胞的生成提供了組織學基礎。但其修复過程及具体机制有待進一步觀察研究。

參考文獻

　〔1〕周清，湯郁同，顧祖維，等.煉釩工人的皮炎調查及病因.中華勞動衛生職業病雜志，1990，8(2)：75
　〔2〕周清，顧祖維，陳自強，等.釩化合物對工人肺功能影響的研究.職業醫學，1990，17(27)：7
　〔3〕張瑾崗，仲來福，夏元洵.五氧化二釩對大鼠腎臟毒性的机理.中華勞動衛生職業病雜志，1990，8(2)：70
　〔4〕張天寶，苟曉燕，楊在昌.五氧化二釩對大鼠的致畸性及敏感期的研究.華西醫科大學，1993，24(2)：202
　〔5〕陳筱春，文質君.偏釩酸鈉對雄性小鼠生殖功能影響的研究.湖南醫學，1997，14(3)：134
　〔6〕文質君，陳筱春，余秀珍.偏釩酸鈉對小鼠睾丸組織學改變的實驗研究.衡陽醫學院，1996，24(增刊)：55
　〔7〕賀石林.中醫科研設計与統計方法.長沙：湖南科技出版社，1989.55
　〔8〕陳震陽.痕量釩的分析.中華勞動衛生職業病雜志，1991，9(2)：109
　〔9〕中醫研究院西苑醫院.趙錫武醫療經驗.北京：人民衛生出版社，1980.85

(收稿日期：1999－08－24)