微生物培养基质控与图解——染色液配制及染色法

来源：青岛海博
 1．美蓝染色法     吕氏碱性美蓝染色液     美蓝                  0.3g     95%乙醇               30ml     0.01%氢氧化钾溶液    100ml     将美蓝溶解于乙醇中，然后与氢氧化钾溶液混合。     染色法：将涂片在火焰上固定，待冷。滴加染液，染1-3分钟，水洗，待于，镜检。     结果：菌体呈蓝色。     2．革兰染色法     结晶紫染色液     结晶紫             lg     95%乙醇            20ml     1%草酸铵水溶液     80ml     将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。     革兰碘液     碘        lg     碘化钾    2g     蒸馏水    300ml     将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300ml。     沙黄复染色液     沙黄       0.3g     95%乙醇    10ml     蒸馏水    90ml     将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。     染色法     将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫色液，染1分钟，水洗。 滴加革兰碘液。作用1分钟，水洗。    滴加95%乙醇脱色，约30秒；或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色10秒。水洗，滴加复染液，复染1分钟。水洗，待干，镜检。   结果   革兰阳性染色量很多因素的影响，与涂片厚薄、酒精脱色时间、染液储存时间、细菌生长时期等有关。 3．耐酸性染色法(萋-倪二氏法)     石炭酸品红染色液     碱性品红    0. 3g    95%乙醇    l0ml     5%酚水溶液    90ml 将品红溶解于乙醇中，然后与酚溶液混合。     3%盐酸-乙醇     浓盐酸    3g     95%乙醇    97ml 复染液   吕氏碱性美蓝染色液   染色法   将涂片在火焰上加热固定，滴加石炭酸品红染色液，徐徐加热至有蒸汽出现，但切不可使沸腾。染液如因蒸发减少时，应随时添加。染5分钟，倾去染液，水洗。     滴加盐酸-乙醇脱色，直至无红色脱落为止（所需时间视涂片厚薄而定，一般为1~3分钟），水洗。    滴加吕氏碱性美蓝染色液。复染30秒~1分钟，水洗，待干，镜检。     结果     耐酸性细菌呈红色，其他细菌、细胞等物质呈蓝色。     4．柯氏染色法     染色液     0.5%沙黄液     0.5%孔雀绿液     染色法     将涂片在火焰上同定，滴加0.5沙黄液，并加热至出现气泡，2-3分钟，水洗。    滴加0.5%孔雀绿液，复染40~ 50秒，水洗，待干，镜检。     结果     布氏杆菌呈红色，其他细菌及细胞呈绿色。     5．奥尔特荚膜染色法     染色液     沙黄    3g     蒸馏水    l00ml     用乳钵研磨溶解。     染色法     将涂片在火焰上固定，滴加染色液，并加热至产生蒸汽后，继续染3分钟。水洗，待干，镜检。     结果     炭疽芽胞杆菌苗体呈褐色，荚膜呈黄色。     6．瑞氏染色法     染色液    瑞氏色液    0.3g   甲醇        60ml   用乳钵研磨溶解。   染色法   涂片待自然干燥后，滴加染色液，固定1分钟。加入等量蒸馏水( pH6.5)，染色3~5分钟，用蒸馏水冲洗，待干，镜检。     7．鞭毛染色法     染色液的配置     甲液：称单宁酸5g，氯化高铁(FeCl₃)1.5g，溶于100ml蒸馏水中，待溶解后加入1%的氧氧化钠溶液1ml和15%的甲醛溶液2ml。     乙液：称2g硝酸银溶于100ml蒸馏水中，在90ml乙液中滴加浓氢氧化铵溶液，到出现沉淀后，再滴加使其变为澄清，然后用其余10ml乙液小心滴加至澄清液中，至出现轻微雾状为止（此为关键性操作，应特别小心）。滴加氢氧化铵和用剩余乙液回滴时，要边滴边充分摇荡，染液当天配，当天使用，2~3天基本无效。     染色法 在风干的载玻片上滴加甲液，4~6分钟后，用蒸馏水轻轻冲净。再加乙液，缓缓加热至冒汽，维持约半分钟（加热时注意勿使出现下燥面）。在菌体多的部位可呈深褐色到黑色。停止加热，用水冲净，干后镜检，菌体及鞭毛为深褐色到黑色。     碱性复红染色法     将0.5g碱性复红染料溶解于20ml 95%乙醇中，然后用蒸馏水稀释至100ml。如有不溶物时，可用滤纸过滤或静置后取上清渡备用。     注：本染色液系用于苏云金芽胞内蛋白质毒素结晶的染色，借以与蜡样芽胞杆菌相区别。