中财网克罗地亚女总统:复发性口腔溃疡和消化性溃疡患者口腔及胃粘膜中的幽门螺杆菌
来源：百度文库 编辑：中财网 时间：2024/05/05 03:43:48
【摘要】 目的 初步探讨复发性口腔溃疡(recurren t oral ulcer,ROU)与消化性溃疡(peptic ulcer,PU)在发病上有无关联。方法 通过ROU与PU患者口腔中的幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)与胃粘膜Hp的 聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测、免疫荧光染色和细菌培养与鉴定， 对口腔与胃Hp进行比较。结果 ROU或/和PU患者口腔粘膜与胃粘膜Hp 阳性率均显著高于对照组(P＜0.01)且口腔中Hp的形态、生化特性、培养条件和免 疫学特性均与胃粘膜Hp相似。结论 ROU的发病机制可能和PU相似， 二者可能有着共同的致病菌-Hp。
【关键词】 复发性口腔溃疡(ROU) 消化性溃疡(PU) 幽 门螺杆菌(Hp)
复发性口腔溃疡(ROU)和消化性溃疡(PU)同为人群中常见病、多发 病且治疗后复发率很高，大量研究表明，PU的发病与Hp感染密切相关［1］，而Hp同 样存在于口腔中并通过“粪-口”或“口-口”传播重新感染［2～4］。本研究旨在 通过ROU和PU患者口腔粘膜和胃粘膜Hp的检测和比较，初步探讨口腔中Hp与ROU的关系及ROU 和PU在发病上的相关性。
材料和方法
200例中男108例，女92例；年龄10～52岁，平均31.4岁。按ROU患者、PU患 者、ROU和PU患者、非ROU和PU健康对照分为4组，ROU按全国统编教材《口腔内科学》第三版 标准进行诊断，PU均由胃镜检查确诊，对照组为自愿受检者。条件控制：①所有受检者取样 前1周内未服用任何抗生素、铋剂、抗酸剂及H2受体拮抗剂，1个月内未服用类固醇类药物 或非类固醇类抗炎药如阿司匹林等；②所有受检者均无严重全身性系统疾病，非Ⅱ度或Ⅱ度 以上牙周炎患者、非口腔粘膜扁平苔藓患者；③各组间年龄、性别、取样位置和方法、患者 牙周条件等可控制因素通过均衡检验，证实无差异，具有可比性。
Hp-PCR检测方法：所有受检者检测晨均按指导刷牙，取样前用无菌生理盐水轻轻将口腔漱干 净，然后刮取每位受检者颊、舌、口底、软腭粘膜少许(ROU患者以溃疡假膜代替相应部位的 口腔粘膜)，同时通过胃镜取胃体部粘膜(PU患者取溃疡部位)作为标本，置于无菌生理盐水 的尖嘴离心管，-40℃保存备检。将备检标本放入400μl无菌生理盐水溶液中离心12000r/mi n×5min，弃上清，加DNA裂解液50μl，蛋白酶K2μl，55℃孵育1h，100℃水浴10min,同时 设置阳性模板和阴性对照(Pacific Econ-TechCo.USA PCR试剂盒)；15000r/min×5min离心 后，取5μl进行PCR检测。PCR扩增产物取15μl，用15g/L琼脂糖凝胶(含0.5g/L溴化乙 锭)经TAE电泳缓冲液，电泳30min(电压5v/cm)后在紫外透射反射仪300nm下观察结果，如果 在200bp处出现橙黄色条带，则诊断为Hp阳性(+)。
胃粘膜Hp培养：C组口腔Hp阳性患者的胃粘膜做Hp培养，以使与口腔Hp比较。在幽门前5cm范 围内用灭活活检钳钳取组织2块，置于装有30%甘油/布氏肉汤转送液0.5ml无菌离心管中 -20℃保存。用改良Skirrow培养基，在含6%微氧条件下37℃培养2～4天后观察。
口腔Hp抗Hp免疫荧光抗体染色：①荧光抗体的制备：胃粘膜培养出来的Hp4株混合配制成每 毫升10亿个细菌的悬浮液，耳缘静脉注射免疫家兔，8次后查血，凝集效价为1：2560， 特异性实验与大肠杆菌、空肠弯曲菌凝集效价均不超过1：80。抗体血清用不饱和硫酸铵提 成粗球。再用0.25mol/L硫酸盐缓冲液将粗球抗体稀释成1%浓度后装入透析液中，用同 一缓冲液将异硫氰酸荧光素配成0.1g/L，10倍于1%抗体体积，放入烧杯中，用电磁搅拌 器在4℃冰箱内透析24小时，经sephadex-G50层析，去除游离荧光素。②染色方法：将口腔 溃疡假膜稀释于0.1ml的生理盐水中，搅匀后涂于盖玻片上，经固定后滴上荧光抗体， 置于37℃暗室冰箱中30分钟，再经pH值7.2的硫酸盐缓冲液冲洗3次，封片。荧光显微镜 观察，以胃粘膜培养出的Hp作阳性对照。
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