速卖通培训课程:液相高效色谱仪

HPLC Determination of Sugars in "Tainong 6" Pineapple
【作者中文名】 刘胜辉; 魏长宾; 孙光明; 臧小平;
【作者英文名】 LIU Sheng-hui1; 2; WEI Chang-bin1; SUN Guang-ming1; ZANG Xiao-ping1; 2（1.South Subtropical Crops Research Institute; Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences; Zhanjiang 524091; China; 2.National Center of Important Tropical Crops Engineering and Technology Research; Haikou 571101; China）;
【作者单位】 中国热带农业科学院南亚热带作物研究所; 国家重要热带作物工程技术研究中心;
【文献出处】 食品科学, Food Science, 编辑部邮箱 2009年 12期 
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  中国期刊方阵  CJFD收录刊
【关键词】 菠萝; 高效液相色谱; 糖;
【英文关键词】 HPLC; pineapple fruit; sugar;
【摘要】 采用高效液相色谱法测定台农6号菠萝果实中糖分含量的方法。以90%乙醇作为提取液,色谱柱为CHO-820(钙型)糖柱(300mm×7.8mm),柱温90℃,流动相为超纯水,流速0.5ml/min,进样体积10μl,用示差折光检测器检测菠萝果实中的糖分。本方法的相对标准偏差为0.59%～0.85%,相关系数在0.9998以上,加标回收率为98.84%～100.6%。台农6号菠萝果肉含糖量与成熟季节有关,夏季果(7月成熟)和秋季果(9月成熟)含蔗糖最高,其次为葡萄糖和果糖,冬季果葡萄糖含量最高、蔗糖含量最低。
【英文摘要】 A method using high performance liquid chromatography(HPLC) was presented for the determination of sucrose,glucose and fructose in "Tainong 6" pineapple.The sugars in pineapple was extracted with 90% ethanol,and the determina-tion was performed on CH-820(Ca) column(300 mm × 7.8 mm,column temperature 90 ℃) with ultrapure water as a mobile phase at the flow rate of 0.5 ml/min using a refractive index detector.There were good linear relationships between HPLC peak area and concentrations of the three sugars wi...
※分析检测食品科学2009,Vol.30,No.12163
葡萄糖、果糖、蔗糖均为国产分析纯；水为超纯水。
1.2仪器与设备
Series200高效液相色谱仪、Series200示差折光检测
器美国PE公司；CHO-820钙型糖柱美国Transgenomic
公司；AT-130柱温箱天津奥特赛恩斯仪器有限公司；
Universal 32R高速台式冷冻离心机德国Hittich公司；
Elix5超纯水仪美国Millipore公司。
1.3标准溶液的配制
准确称取果糖、葡萄糖、蔗糖各2 0 g，转移至
1000ml容量瓶中，用双蒸水定容至刻度，得到各自浓
度均为20mg/ml的混标溶液。逐级稀释至10、5、2.5、
1.25、0.625mg/ml。
1.4色谱分析条件
色谱柱为CHO-820钙型糖柱，柱温90℃，流动相
为超纯水，流速0.5ml/min，进样体积10μl。
1.5样品处理
样品处理常用方法有水提法[1]、醇提法[8]，本实验
中色谱柱为离子交换树脂，对蛋白质及金属离子相当敏
感，因此用乙醇提取法，参照文献[8]的方法略有改进。
准确称取经搅拌器搅碎混匀的菠萝果肉1.00g，用4ml
90%的乙醇溶液研磨，10000r/min离心10min，残渣加
入2ml提取液再提取，合并上清液，90℃水浴蒸干，定
容至l0ml，漩涡混合后用一次性注射器抽取提取样液，经
0.45μm滤膜过滤后以备上机分析。每个样品重复3次。
2结果与分析
2.1标准曲线的制作
取各浓度标准溶液20、10、5、1.25、0.625mg/ml，
进样10μ1，以标样浓度Y(mg/ml)为纵坐标，标样峰面
积X(mV)为横坐标，绘制标准溶液曲线，计算线性回归
方程，结果见表1。
图1三种糖混合标准样品的HPLC色谱图
Fig.1 HPLC chromatogram of mixed sucrose,glucose and
fructose standards
50
0
蔗糖
Vm
时间(min)
0 5 10 15 20
葡萄糖果糖
组分线性回归方程相关系数线性范围(mg/ml)
蔗糖y=3×10-6+0.0661 0.9998 0.625～20
葡萄糖y=4×10-6+0.1741 0.9999 0.625～20
果糖y=3×10-6+0.1694 0.9998 0.625～20
表1标准曲线的回归方程、相关系数和线性范围
Table 1 Regression equation,correlation coefficient and linear
range for sucrose,glucose and fructose
成熟时期蔗糖(g/100g FW)葡萄糖(g/100g FW)果糖(g/100g FW)
7月4.67 4.25 3.06
9月4.39 3.87 2.77
11月1.5 3.27 2.59
表3不同季节成熟的台农6号菠萝糖分含量的差异
Table 3 Contents of sucrose,glucose and fructose in“Tainong
6”pineapple at different harvest time
对待测的菠萝果肉提取液同一样品重复进样五次，
测定峰面积，并通过计算相对标准偏差(RSD)考查其测
定的精密度，得出三种糖的RSD依次为果糖0.85%、葡
萄糖0.59%、蔗糖0.78%，说明精密度良好(表2)。
2.3回收率实验
采用加标样回收法，每个样品取2份，一份加入
蔗糖、葡萄糖、果糖的标准溶液，一份不加，平行
测定五次，计算回收率，结果见表2。实验表明，3
种糖的平均回收率分别为98.84%、100.6%、98.84%，
说明该方法具有较高的准确度。
2.4菠萝样品分析
按照1.4节色谱条件，将不同季节成熟的台农6号
菠萝样品溶液进行前处理后，进样10.0μ1进行液相色
谱分析，测定果糖、葡糖糖、蔗糖的色谱峰峰面积，
代入工作曲线分别计算其含量，结果见表3，样品色谱
图见图1。
3结论与讨论
本研究用CHO-820钙型糖柱作为分析柱，水为流动
相，柱温90℃，分析菠萝果实中的果糖、葡萄糖、蔗
糖，保留时间重现性好，三者的含量和峰面积比值之
间呈良好的线性关系，相对标准偏差为0.59%～0.85%，
加标回收率为98.84%～100.6%，是一种简便、快速、
准确的检测方法。
不同季节成熟的菠萝含糖量存在较大的差异，本研
究结果表明7月份成熟的果实蔗糖、葡萄糖、果糖含量
均高于9、11月成熟的果实；11月成熟的果实蔗糖含量
最低。
2.2精密度实验
组分样品含量(mg)加标量(mg)测得量(mg)回收率(%)RSD(%)
蔗糖45.51 40 84.52 98.84 0.85
葡萄糖35.98 40 76.47 100.6 0.59
果糖27.93 30 57.26 98.84 0.78
表2方法的精密度和回收率
Table 2 Recoveries and RSDs of precision for sucrose,glucose
and fructose in sample spiked(n=5)1642009,Vol.30,No.12食品科学※分析检测
氨基柱及改性氨基柱在进行糖类分析时具有快捷省
时的优点，因而一度被认为是分离糖的较佳方法，但
无论是Luna NH2、Agilent NH2柱还是Zorbax糖分析柱
测定糖类，时间过长均容易出现拖尾、葡萄糖和果糖
分离不佳的现象，且线性范围一般在1～10mg/ml。而
CHO-820钙型糖柱是依据离子交换的原理，分离度好、
线性范围宽(0.625～20mg/ml)，虽然保留时间较长，但
由于使用超纯水作为流动相，避开了剧毒溶剂乙腈的使
用，即经济又环保，且该柱可以再生，使用寿命相对
较长。虽然价格较贵，但从长远利益来说，是替代氨
基柱测糖的最佳选择。
参考文献：
[1]张秀梅,杜丽清,谢江辉.高效液相色谱法测定菠萝果实中的糖分
[J].食品科学,2007,28(11):450-452.
[2]SMITH L G.Optimisation of fresh-market pineapple eating quality in
Queensland[J].Acta Horticulturae,1993,334:287-294.
[3]何照范,张迪清.保健食品化学及其检测技术[M].北京:中国轻工业
出版社,1998:161-169.
[4]张龙翔.张庭芳卜李令媛生化实脸方法技术[M].北京:高等教育出
版社,1981.
[5]杨亚玲,孟冬玲,孙海林,等.固相萃取和高效液相色谱法测定水果
中的糖[J].云南化工,2003,30(2):28-30.
[6]周红,杨样良,张晓显,等.半纤维素菌株发醉液中单糖及二搪的分
析[J].武汉化工学院学报,2002,24(4):17-19.
[7]李云康,潘思轶.高效液相色谱法测定柑橘汁糖的组成[J].食品科
学,2006,27(4):190-192.
[8]赵仁邦,刘孟军.高效液相色谱法测定枣果实中的糖分[J].食品科
学,2004,25(8):138-141.