中财网什么的荒原填空:蓝白班筛选 注意事项
来源：百度文库 编辑：中财网 时间：2024/05/09 14:13:06
1 实际操作中发现当插入小片段时，重组子也有形成浅蓝斑的情况.即蓝色菌斑也有可能含外源基因2 大概有30%的假阴性. 若形成的白斑很多，但仍不是阳性克隆，需仔细检查你的质粒载体和目的片段连接转化时间温度控制好 避免载体自连并且排除你的酶切插入位点等没有出现设计问题3 若用T载体连接，有时会出现蓝白斑，但有时出现全是白斑。
原因：
1）X-gal涂得不够或IPTG加得不够，因为大肠杆菌的有些菌株如JM109，其LacI(B-半乳糖苷酶的调节基因）是突变型的，即为lacIq，相对野生型（如DH5a）的LacI来说，其对乳糖操纵子的抑制要强10倍。
2）显色的时间可能不够，延长时间或放入低温冰箱可加强显色。
3）连接产物里面空载的载体本来就极少，这可能是主要原因。 T载体的制备实际上通过酶切和加T的酶反应得来的，由于酶反应不可能100％向单方向彻底进行，所以在T载体试剂中总是有未切开的环状载体分子和线性未加T的载体分子存在的，在连接反应进行时，这些线性载体分子又会环化，转入细菌，产生蓝色菌落。所以在连接转化的细胞中肯定是有蓝色菌落的。
原因：
1）X-gal涂得不够或IPTG加得不够，因为大肠杆菌的有些菌株如JM109，其LacI(B-半乳糖苷酶的调节基因）是突变型的，即为lacIq，相对野生型（如DH5a）的LacI来说，其对乳糖操纵子的抑制要强10倍。
2）显色的时间可能不够，延长时间或放入低温冰箱可加强显色。
3）连接产物里面空载的载体本来就极少，这可能是主要原因。 T载体的制备实际上通过酶切和加T的酶反应得来的，由于酶反应不可能100％向单方向彻底进行，所以在T载体试剂中总是有未切开的环状载体分子和线性未加T的载体分子存在的，在连接反应进行时，这些线性载体分子又会环化，转入细菌，产生蓝色菌落。所以在连接转化的细胞中肯定是有蓝色菌落的。