中国共青团的基本知识:明胶酶谱法操作
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明胶酶谱法操作
(2008-08-16 11:59:59) 转载▼标签:杂谈
分类: 实验室知识积累明胶酶谱法
原理:
复性原理:在电泳过程中,SDS与样品中的MMPs结合(当然是可逆性结合),破坏其氢键、疏水键而使MMPs不能发挥其分解明胶的作用,而只有当将胶置Trition中洗脱(最好是放在摇床上摇,30min/次,做2次或15min/次,4次。静置于Trition中是不妥的。)时,由于SDS被Trition结合而去除,从而使MMPs恢复了活性。
试剂的配制
(1)配制10%SDS聚丙烯酰胺凝胶(含1.0mg/ml 明胶,配好后1周内使用,明胶含量低灵敏度高)
A.分离胶的配制(注:根据你所用的电泳仪胶的大小确定配制胶的量)
10% SDS聚丙烯酰胺凝胶 10ml(包括)
ddH2O
30%储备胶(0.8%BIS+29.2%丙烯酰胺)
1.5mol/l Tris(PH 8.8)
10% SDS
10%过硫酸铵(APS)
TEMED
1%明胶(1g明胶-->100ml,37°C水浴溶解) 0.5ml
B.浓缩胶的配制
浓缩胶
ddH2O
30%储备胶
1mol/l Tris-HCL( PH 6.8)