智汇卡哪些地方可以用:亚硒酸钠对人白血病的研究

来源：百度文库 编辑：中财网 时间：2024/04/30 00:46:14

亚硒酸钠对人白血病的研究

目的和方法：实验观察亚硒酸钠对人急性髓性白血病细胞系HL-60细胞生长增殖、诱导分化、细胞内自由基产生和清除系统以及胞内环核苷酸累积的影响，探索亚硒酸钠对人白血病HL-60细胞作用机制。结果：8×10-6mol/L或更高浓度的亚硒酸钠均可显著抑制HL-60细胞的生长增殖，作用5 d可在一定程度上诱导HL-60细胞向成熟粒细胞方向分化。8×10-6mol/L亚硒酸钠作用一段时间，可增强自由基清除系统酶活性，减低胞内自由基水平，降低细胞内cGMP累积而对cAMP 累积无明显影响。结论：硒的抗白血病作用可能与亚硒酸钠的这些作用相关。　　近年来的研究表明，硒有防止肿瘤发生、抑制肿瘤生长增殖、促进恶性肿瘤细胞逆转分化的作用，但有关硒防治肿瘤的机制并未阐明。本研究实验观察亚硒酸钠抑制HL-60细胞生长增殖，促进其逆转分化的作用，同时观察亚硒酸钠对HL-60细胞的自由基产生和清除系统以及对细胞内环核苷酸累积的影响，探讨亚硒酸钠抗白血病作用的机制。　　材料与方法　　(一)人急性髓系白血病细胞系HL-60细胞(AML-M2型白血病细胞)的培养：HL-60细胞引自中国医学科学院药物研究所，以含10%新生小牛血清的RPMI1640培养液培养于二氧化碳培养箱(5%CO2，95%空气，饱和湿度)，每3～4 d传代1次。
(二)HL-60细胞生长曲线的绘制：取对数生长期HL-60细胞，以1×104／mL密度接种25 mL培养瓶，每瓶5 mL，置二氧化碳培养箱培养24 h后，实验组分别加8×10-4mol／L亚硒酸钠50或100 μL使终浓度分别为8×10-6mol／L和1.6×10-5mol／L，对照组加入100 μL完全培养液，均各两平行瓶。于加亚硒酸钠后1～9 d，每日从各瓶无菌取样50 μL，加同体积0.4%台盼蓝溶液混匀，以血细胞计数板计数活细胞，取各平行瓶的均值。重复3次。以培养时间为横坐标，活细胞数为纵坐标绘制生长曲线。 　　(三)HL-60细胞诱导分化的形态学观察：HL-60细胞按2×105／mL的密度接种于25 mL培养瓶，每瓶4 mL，共6瓶。实验组每瓶加3.2×10-4mol／L亚硒酸钠应用液0.1 mL，使终浓度为8×10-6mol／L，阴性对照组加同体积完全培养液，阳性对照组加DMSO使终度为1.25%。各两平行瓶。置37℃、5%CO2、饱和湿度环境培养5 d，于d 5以涂片离心机(北京医用离心机厂，LXT2.5型)制作细胞涂片，Wright染色，1 000×油镜下观察形态学改变，进行细胞分类计数。实验重复3次以上。由固定人员阅片。同样处理的细胞用于MDA、SOD和环核苷酸累积的测定。　　(四)NBT反应：按参考文献方法进行。　　(五)MDA含量测定：硫化巴比妥钠酸(TBA)荧光法，结果以nmol/mg pr表示。　　(六)超氧化物歧化酶(SOD)活性测定：取样品加氯仿酒精混合液，混匀，3 500 r/min离心10 min，吸上清液，按Pyrogallol-NBT比色法测定。　　(七)环核苷酸累积测定：同批培养的HL-60细胞分别分为对照管和实验管，每管加3-异丁基1甲基黄嘌呤(3-isobutyl-1-methylxanthine, IBMX)800 μmol/L，保温37℃， 30 min。然后，各实验管换含亚硒酸钠培养液，对照管换同体积的培养液，保持37℃，30 min离心1 000 r/min 5 min，弃上清，细胞团块加80%乙醇，以超声波匀浆器制成匀浆，供环核苷酸提取、测定和蛋白质测定。亚硒酸钠对静息的和肾上腺素(5×10-5mol/L)刺激的环核苷酸累积的实验和测定方法参考文献，结果以pmol/106　cells.30 min-1表示。　　(八)蛋白质测定方法：采用Lowry等方法，牛血清白蛋白(fraction V)作为标准品。　　结　果　　(一)亚硒酸钠对HL-60细胞生长、增殖的影响：亚硒酸钠8×10-6mol／L和1.6×10-5mol／L对HL-60细胞生长增殖均有显著影响(图1)。且呈剂量依赖性的抑制作用。(二)亚硒酸钠对HL-60细胞的诱导分化作用：亚硒酸钠(终浓度8×10-6mol／L)作用5 d可在一定程度上诱导HL-60细胞分化，出现细胞形态学的右移(表1)，NBT实验的阳性率增高。亚硒酸钠组NBT试验阳性率(50.75±6.72)%，与阳性对照组DMSO(55.50±16.26)%相近，而与阴性对照组(9.25±2.47)%差异非常显著(P＜0.01)。表1　亚硒酸钠作用下HL-60细胞的形态学改变　　Tab 1 Effects of sodium selenite on morphology of HL-60 cells (n=200)GroupMorphology(%)MBPMMYMMMGControl42.045.012.10.90DMSO20.348.723.27.00.8Sod.selenite25.855.517.31.20.2MB:Myeloblast PM:Promyelocyte, MY:Myelocyte,; MM:Metamyelocyte；　MG:Mature granulocyte (including band form and segmented)表2　亚硒酸钠对HL-60细胞MDA和SOD的影响　　(三)亚硒酸钠对HL-60细胞自由基产生和清除系统的影响：8×10-6mol／L亚硒酸钠作用1、 3、 5 d，可见HL-60细胞自由基的产生量(以MDA为指标)随硒作用时间的加长逐步减少，而HL-60细胞对自由基的清除能力(以SOD活性为指标)则随硒作用时间的加长而逐步增高(表2)。　　Tab 2 Effect of sodium selenite on level of MDA & SOD of　　HL-60 cells (±s，n=10)

GroupMDA(nmol/mg pr)SOD(U/mg pr)Control0.833±0.0347.870±0.544Sod.selenite　　1dd0.712±0.029*9.970±0.587**3dd0.696±0.025*10.280±0.442**5dd0.666±0.025**12.889±0.880**

　　*P＜0.05, 　**P＜0.01, vs control　　(四)亚硒酸钠对HL-60细胞静息的和肾上腺素刺激的环核苷酸累积的影响：亚硒酸钠(终浓度8×10-4mol／L处理30 min)对HL-60细胞静息的和肾上腺素刺激的cAMP累积均无明显影响，但可明显降低静息的和肾上腺素刺激的cGMP累积和增高cAMP/cGMP比值(P＜0.01)(表3)。表3　亚硒酸钠对HL-60细胞静息的环核苷酸累积的影响　　Tab 3 Effects of sod. selenite on cGMP & cAMP accumulation of HL-60 cells at rest or　　stimulated by adrenalin (pmol/106, cells.30 min-1±s)

R/SGroupncAMPcGMPcAMP/cGMPRControl91.720±0.7710.0762±0.028721.670±7.201　Sod. selenite91.940±0.9760.0619±0.017136.030±13.177**SControl82.440±0.7490.0720±0.017734.570±11.756　Sod. selenite82.650±0.5600.0581±0.013949.640±15.363**

    对花有研究的人进来 对数码有研究的人进~~ 对篮球鞋有研究的人请进 对圣地亚哥的研究 科学家对火星的研究? 人们对月球的研究 对超女有研究的进 春节对春联的研究 谁对狗很有研究的？ 国内对电子秤的研究 对粉妆有研究的请问 对白血病有了解的专家请帮忙！关于半相合骨髓移植与白血病疫苗 自认对人的心理有研究的来。 对烟及抽烟的人有研究的请进 现在科学对人的性格研究怎样？ 对文言文有研究的达人请进！ 对埃及古史有研究的人请进，问一点问题 对数码照相机有研究的人进来帮个忙！ 急：对西面奶油研究的人请进~ 硬盘噪音(对笔记本电脑有研究的人进) 对茶有研究的人都进来 对遗传有研究的人来看看！ 对杀毒软件有研究的人进来一下,,, 对巴斯克人起源的研究开始于何时？