中财网深圳博爱医院飞秒 失败:论毒理实验动物组织病理制片要素 - 期刊杂志|免费杂志|电子杂志|杂志下载
来源：百度文库 编辑：中财网 时间：2024/04/28 17:25:40
论毒理实验动物组织病理制片要素
推荐本文□ 作者单位：成都中医药大学,四川 成都 610000
【摘要】 病理学技术是研究疾病机制、新药开发及其毒副作用的重要手段之一，它无论是在急性毒性试验，长期毒性试验，致畸试验，还是致癌试验，其病变的发现、部位的确定等均与病理制片质量有着密切的关系，可直接影响新药安全的评价水平。为适应中医药研究的发展需要，提高药物非临床研究质量管理规范（glp）。本文对病理制片操作规范化的重要性以及从病理组织的取材、固定、脱水、包埋、切片、染色等步骤的细节之处做了探讨，较详细的介绍了其方法及制作要素。
【关键词】 长期毒性试验 病理制片 质量
病理组织石蜡切片技术并不复杂,经取材、固定、脱水、包埋、切片、染色等步骤后，在显微镜下就能观察。它能反映出机体的结构和形态变化；并能测定其细微结构的大小、数量及所含物质量的多少；同时,还可观察其结构或所含物质在不同实验条件下的变化，以了解机体、组织、细胞的活动、分化以及细胞间的相互关系。但要制出一批高质量的组织切片,需要在每一个细小的操作步骤上下功夫，注意避免影响切片质量的各种因素。为此，我将十多年来对动物组织病理制片技术实践工作中应注意的问题给予总结并提出解决办法，论述提高病理组织切片质量的制作要点。
1 材料
长毒动物模型的病理取材涉及多个靶向脏器甚至所有常规实验脏器，这就决定了它与单一脏器制片有不同之处，因而取材一定要规范。所取的组织应大小适中，厚薄一致，形状规整。首先，由于长毒试验所取组织种类多、数量大，常出现错取或漏取组织，故事先一定要列出所取组织的清单，确定并统一所取部位（单侧或双侧）。其二，对体积过小的组织标本（如甲状腺、脑垂体、视神经等）要用擦镜纸单独进行包裹或连带相关组织进行取材；对体积较大的组织标本以2 mm～4 mm为宜（如心、肾、睾丸应修掉两侧球冠，胃、肠还应注意纤维、肌肉的走向）。其三，对于取下后不易区分的组织标本（如空、回、结肠、鼠的子宫、坐骨神经，视神经等)，以不同长度或用特殊记号进行标记。其四，剖开的腔、囊、肌纤维、神经等标本一定要贴附在滤纸上以防卷曲。其五，对肿瘤标本应是多部位的取材，即上、下、左、右、中间及肿瘤组织与正常组织交界处均应取到。
2 固定
在制片过程中，固定是首要条件。固定的好坏，主要取决于固定液的浓度，固定时的温度和时间等。组织的固定我们通常采用10％中性福尔马林液，它不仅能完整的保存细胞生存时的形态结构，还可防止抗原的弥散。(1)组织取材后一定要及时的固定，如不及时固定，小标本组织会发生干缩或变硬，大标本组织要收缩或自溶。(2)组织的固定时间一般为24 h～48 h，标本量多时，时间要适当延长。(3)固定液不得少于标本体积的10％～20％，固定液不足会造成组织固定不佳，影响后期制片工作。(4)在固定时间内要随时翻动、摇晃标本，也可在瓶底衬以少量的纱布或滤纸以确保各组织的各个部位得到充分的渗透。(5)若长时间固定的组织，切片上出现福尔马林色素沉着时，可用1％碱酒精（1% naoh 1 ml, 80% 乙醇99 ml）处理10 min，水洗5 min。（福尔马林色素呈棕黄色或棕褐色，且无光泽，是不溶于水、乙醇、二甲苯等的沉淀物，它常见于血管组织周围）。(6)固定后的组织一定要经流水冲洗半小时，这样可使染色鲜艳。
3 脱水透明
通常的脱水剂是酒精，为防止组织过度收缩变形，一般采用梯度脱水法。经反复实践，我们通常将：(1)小块组织（甲状腺、脑垂体、坐骨神经等），易脆组织（心、肝、脾、淋巴结、腺体等），修块的当天进70％酒精，晚上进80％酒精，次日白天进90％酒精，95％酒精等后续工作。(2)大块组织（脑、睾丸等），含水多的组织（皮肤、膀胱、胃、肠等），含气体多的组织（肺等），修块的当天进70％酒精，晚上进80％酒精，次日白天进90％酒精。晚上进95％酒精（4℃冰箱过夜），第三天做后续工作，以保证体积大的组织充分脱水，并留出时间差以便进行包埋。(3)注意小块的、易脆的组织在高浓度酒精里脱水时间不宜过长，而较大的组织则应适当延长脱水时间。(4)95％酒精、无水酒精要各进两次。每次的时间为半小时至一小时，此时的酒精浓度一定要保持准确。