2016华鼎奖时间:dna 纯化 醋酸钠 原理
来源:百度文库 编辑:中财网 时间:2024/04/29 14:31:40
首先,向酶切体系添加1/10体积浓度为3M的NaAc,混匀后,整个体系的Na+浓度就是0.3M(生理盐水的Na+浓度大约为0.15M)。这么多的Na+均匀地分散到DNA表面,屏蔽掉DNA链上PO4-的负电荷,有利于DNA链的压缩。否则的话,PO4-彼此排斥,DNA就不容易聚集。
接着,向整个体系添加2倍体积的无水乙醇。乙醇和水的互溶性很好,加进去后,乙醇就把DNA表面的水膜夺走。换句话说,水和乙醇混去了,原本溶解在水中的DNA只好被挤了出来。第一步加入的Na+平衡了PO4-的电荷,被挤出来的DNA就轻易堆积在一起了。
经过离心(12,000 rpm × 5 min),被挤出来的DNA就全部被甩到了离心管底部。把上清倒掉,剩下DNA。然而,这时的DNA不纯,还混有酶切体系留下来的盐分,以及变性了的酶。酶变性了,量也不多,不用清除。
向离心管中加入足够量的70%乙醇。这时候,既有足够的乙醇保证DNA不溶于水,又有足够的水把盐份从DNA沉淀里溶解出来。你可以选择短暂离心,或者静置1分钟,来溶解盐分。然后,去干净上清,这样剩下的DNA就不含多余的盐分等杂质,从而不会影响后续实验。
把沉淀烘干,最后用适量的水(或者TE溶液,tris保持弱碱性;EDTA螯合金属离子,抑制依赖于金属离子的DNAse;这样的DNA溶液质量更高)溶就可以了。
接着,向整个体系添加2倍体积的无水乙醇。乙醇和水的互溶性很好,加进去后,乙醇就把DNA表面的水膜夺走。换句话说,水和乙醇混去了,原本溶解在水中的DNA只好被挤了出来。第一步加入的Na+平衡了PO4-的电荷,被挤出来的DNA就轻易堆积在一起了。
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