夏普2048n打印机错误:细菌生理生化试验
来源:百度文库 编辑:中财网 时间:2024/04/29 19:32:31
细菌生理生化试验
微生物生理生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物,生理生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区分的微生物。因此微生物生理生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一,微生物鉴定中常用的生理生化反应如下所示:
(一) 糖、醇发酵试验
原理:
不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异,或能利用或不能利用,能利用者,或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。有些细菌分解某些糖(醇、苷)产酸(符号:+)、产气(符号:○),培养基由紫(蓝)变黄(指示剂溴甲酚紫或溴百里酚蓝由紫或蓝遇酸变黄的结果),并有气泡;有些产酸,仅培养基变黄;有些不分解糖类(符号:-),培养基仍为紫(蓝)色。
培养基配制:
一般细菌常用休和李夫森二氏培养基:
蛋白胨:
芽孢杆菌培养基配制:
(NH4)2HPO4:
将以上培养基分装试管,培养基高度约为4~
测定的糖(醇、糖苷)类可以包括:葡萄糖、蔗糖、甘露糖、乳糖(1.5%)、半乳糖(1.5%)、D-山梨醇、果糖、阿拉伯糖、麦芽糖、纤维二糖、木糖、水杨苷等。
注意:以上亦可用液体培养基。
接种和观察结果:
用18~24h的幼龄菌种,用穿刺针接种于培养基中,适温培养1d,3d,5d后观察,颜色变黄为阳性,不变为阴性;有气泡产生为产气。
结果记录:
产酸:+,产气:○,不产酸长气:- 。
(二) 淀粉水解试验
原理:
某些细菌可以产生分解淀粉的酶,把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解后,遇碘不再变蓝色。
培养基配制:
牛肉膏
试验方法:
以18~24h的纯培养物,点接于淀粉琼脂平板(一个平板可分区接种)或直接移种于淀粉肉汤中,于36±
淀粉水解系逐步进行的过程,因而试验结果与菌种产生淀粉酶的能力、培养时间,培养基含有淀粉量和pH等均有一定关系。培养基pH必须为中性或微酸性,以pH7.2最适。淀粉琼脂平板不宜保存于冰箱,因而以临用时制备为妥。
结果记录:分解:+,不分解:-。
(三) V-P试验
原理:
菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸缩合,脱羧成乙酰甲基甲醇,后者在强碱环境下,被空气中的氧氧化为二乙酰,二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物,称V-P(+)反应。
培养基配制方法:
蛋白胨
试剂:40%NaOH(或KOH),a-萘酚。
试验方法:
将试验菌接种于上述培养基,于36±
结果记录:阳性:+,阴性:- 。
(四) 甲基红(Methyl Red)试验
原理:
有些细菌能发酵葡萄糖,在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸,进一步分解中,由于糖代谢的途径不同,可产生乳酸,琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物,可使培养基PH值下降至pH4.5以下,使甲基红指示剂变红。
培养基配制方法:
与V-P试验培养基一致。
试剂:甲基红:
试验方法:
挑取新的待试纯培养物少许,接种于通用培养基,培养于36±
结果记录:阳性:+,阴性:- 。
(五) 菌膜形成试验
有些菌在液体培养基中能形成菌膜,利用这一特征可进行不同细菌的区别。
培养基配制方法:蛋白胨:
试验方法:接种后于
(六) 明胶(Gelatin)液化试验
原理:
有些细菌具有明胶酶(亦称类蛋白水解酶),能将明胶先水解为多肽,又进一步水解为氨基酸,失去凝胶性质而液化。
培养基配制方法:蛋白胨:
试验方法:
挑取18~24h待试菌培养物,以较大量穿刺接种于明胶高层约2/3深度。于20~
(七) 尿酶(Urease)试验
原理:
有些细菌能产生尿素酶,将尿素分解、产生2个分子的氨,使培养基变为碱性,酚红呈粉红色。尿素酶不是诱导酶,因为不论底物尿素是否存在,细菌均能合成此酶。其活性最适pH为7.0。
培养基配制方法:
蛋白胨:
除酚红外,溶解上述成分,并调节PH为6.8~6.9,然后加入酚红指示剂,使培养基呈橙黄色,分装,
试验方法:
挑取18~24h待试菌培养物大量穿刺接种于琼脂斜面,不要到达底部,培养1~4d观察结果,如为阴性应继续培养一下,作最终判定,变为粉红色为阳性。
(八) 氧化酶(Oxidase)试验
原理:
氧化酶亦即细胞色素氧化酶,为细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶,氧化酶先使细胞色素C氧化,然后此氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化,产生颜色反应。
试剂:
试验方法:在琼脂斜面培养物上或血琼脂平板菌落上滴加试剂1~2滴,阳性者Kovacs氏试剂呈粉红色~深紫色,Ewing氏改进试剂呈蓝色。阴性者无颜色改变。应在数分钟内判定试验结果。
(九) 过氧化氢酶试验(触酶试验)
具有过氧化氢酶的细菌,能催化过氧化氢生成水和新生态氧,继而形成分子氧出现气泡。
方法:直接滴加3%过氧化氢于不含血液的细菌培养物中,立即观察,有大量气泡产生者为阳性,不产生气泡者为阴性。
(十) 精氨酸脱羧基酶试验
培养基:
K2HPO4:
NH4Cl:
MgSO4:
酵母膏:
葡萄糖:
DL-精氨酸:
1.6%溴甲酚紫: 1mL
H2O: 1000mL
pH: 6.7-6.8
分装试管,
接种后置
(十一) 卵磷脂酶试验:
培养基:
蛋白胨:
酵母膏:
NaCl:
琼脂:
H2O: 1000mL
pH: 7.0-7.2
分装三角瓶,
用75%乙醇将新鲜鸡蛋表面消毒,并用经火焰灭菌的镊子将鸡蛋打一个孔,倾去蛋清,然后用5mL无菌吸管吸出卵黄,加入到融化后冷却至
(十二) 蛋白质水解试验:(即明胶水解试验)
培养基:
牛肉膏:
蛋白胨:
明胶:
葡萄糖:
NaCl:
K2HPO4:
KH2PO4:
琼脂:
H2O: 1000mL
分装三角瓶,
将培养基融化后倒平板,并点接菌种,
(十三) 七叶苷试验(七叶灵试验):
培养基:
牛肉膏:
七叶灵:
琼脂:
H2O: 1000mL
pH: 自然
分装三角瓶,
另配5%FeCl3水溶液,单独灭菌。培养基融化后,先将每个平板加上FeCl3溶液二滴,然后倒培养基混匀,凝固后点接菌种,
(十四) Tween 80试验:
培养基:
蛋白胨:
NaCl:
CaCl2:
琼脂:
H2O: 1000mL
分装三角瓶,
冷却至
(十五) 水杨苷试验:
培养基:
K2HPO4:
NH4Cl:
MgSO4:
酵母膏:
1.6%溴甲酚紫: 1mL
H2O: 1000mL
pH: 7.0-7.2
水杨苷:
分装试管,
接种后置
(十六) 实施几丁质利用实验:
胶体几丁质:
蛋白胨:
MgSO4:
FeSO4:
KH2PO4:
K2HPO4:
ZnSO4:
琼脂:
pH: 7.2-7.4
H2O: 1000mL
分装三角瓶,
冷却至
胶体几丁质的制备:
称取
(十七) 精氨酸脱羧基酶试验
培养基:
K2HPO4:
NH4Cl:
MgSO4:
酵母膏:
葡萄糖:
DL-精氨酸:
1.6%溴甲酚紫: 1mL
H2O: 1000mL
pH: 6.7-6.8
分装试管,
接种后置
(十八) 卵磷脂酶试验:
培养基:
蛋白胨:
酵母膏:
NaCl:
琼脂:
H2O: 1000mL
pH: 7.0-7.2
分装三角瓶,
用75%乙醇将新鲜鸡蛋表面消毒,并用经火焰灭菌的镊子将鸡蛋打一个孔,倾去蛋清,然后用5mL无菌吸管吸出卵黄,加入到融化后冷却至
(十九) 蛋白质水解试验:(即明胶水解试验)
培养基:
牛肉膏:
蛋白胨:
明胶:
葡萄糖:
NaCl:
K2HPO4:
KH2PO4:
琼脂:
H2O: 1000mL
分装三角瓶,
将培养基融化后倒平板,并点接菌种,
(二十) 七叶苷试验(七叶灵试验):
培养基:
牛肉膏:
七叶灵:
琼脂:
H2O: 1000mL
pH: 自然
分装三角瓶,
另配5%FeCl3水溶液,单独灭菌。培养基融化后,先将每个平板加上FeCl3溶液二滴,然后倒培养基混匀,凝固后点接菌种,