中财网debian 更新源:细胞的冻存、复苏与运送!
来源：百度文库 编辑：中财网 时间：2024/04/28 00:07:36
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细胞的冻存、复苏与运送! ◆点击数：0 ◆发表日期：2007-12-27
细胞的冻存
细胞冻存液一般可有如下组成：
A 含有血清的冻存液：加入10%～20%(v/v)血清和5%～10%(v/v)DMSO的培养基；
B 无血清冻存液：细胞条件无血清培养基与含9-10％二甲基亚砜的新鲜的无血清培养基1：1混匀。
细胞冻存过程一般为：
1) 消化贴壁细胞或收集悬浮细胞，将细胞悬液收集至离心管中；
2) 1000rpm离心5～10分钟，弃上清液；
3) 用一定量冻存液将细胞重悬，计数，调整细胞密度至106～107个/ml左右；
4) 将细胞悬液分装至2ml冻存管中，每管1～1.5ml；
5) 将冻存管口封，贴上标签，做好记录；
6) 按下列程序降温： 4℃（1～2小时）→－20℃（1～2小时）→－80℃（16～18小时或隔夜）→液氮（LN2）。
【冻存注意事项】：
(1) 细胞应在生长良好、致密度约为80～90％、活力较高（90%以上）的状态下冻存；
(2) 冻存前应检测细胞是否仍具其特有性质，例如杂交瘤细胞应在冻存前1～2日检测产生 抗体的能力；
(3) 所用DMSO应为试剂级等级，以5~10ml小体积无菌分装，4℃避光保存，勿多次解冻；
(4) 细胞的冻存浓度：
正常人类成纤维细胞（normal human fibroblast）：1～3×106 cells/ml ；
贴壁肿瘤细胞（adherent tumor lines）：5～7×106 cells/ml，依细胞种类而异；
杂交瘤细胞（hybridoma）：1～3×106cells/ml，细胞浓度不要太高，某些hybridoma会因冷冻浓度太高而在解冻24小时后死去；
其它悬浮细胞（other suspensions）：5～10×106cells/ml；
细胞的复苏
1) 从液氮罐中取出冻存管，立即放入37℃水浴内，轻晃冻存管使液体尽快融化，通常应在1分钟内融化；
2) 用75%的酒精棉球擦拭冻存管及管盖，将解冻的细胞悬液移至培养瓶（皿）培养或灭菌离心管内离心弃上清去除DMSO后再培养；细胞解冻后是否立即去除冷冻保护剂(DMSO或甘油)，依细胞种类而异，一般而言，大都不需要立即去除冷冻保护剂，无血清培养基冻存的细胞一般解冻后需立即去除冷冻保护剂。
⑴若要立即去除，可将解冻的细胞悬浮液加入含5～10ml培养基的离心管内，离心（800～1000 rpm, 5 分钟），弃去上清液，加入新鲜培养基，混合均匀，置培养箱培养；
⑵若不需立即去除冷冻保存剂，则在解冻培养后次日更换培养基。
细胞的运送
1) 冷冻储存运送
指利用特殊容器内盛液氮或干冰保存运送细胞，效果较好，缺点是比较麻烦，不宜长时间运输，成本较高。
2)充液法
一般选择生长良好的细胞，以汇合1/3～1/2为宜，去掉原培养液，补充新培养液至瓶颈部，保留微量空气，拧紧瓶盖，并用胶带密封，放在用棉花等做防震防压处理的运送盒内。
(1) 运输时间若需4～5天，一般放在贴身口袋即可，到达目的地后倒出多余的培养液，只需保留维持细胞生长所需的培养液置37℃培养，次日传代；
(2) 若仅需数小时运输路程，可将培养瓶的细胞附着面朝上，或把培养液全部倒掉放在贴身口袋运送。
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您当前所在位置：信息中心细胞的冻存、复苏与运送! ◆点击数：0 ◆发表日期：2007-12-27
细胞的冻存
细胞冻存液一般可有如下组成：
A 含有血清的冻存液：加入10%～20%(v/v)血清和5%～10%(v/v)DMSO的培养基；
B 无血清冻存液：细胞条件无血清培养基与含9-10％二甲基亚砜的新鲜的无血清培养基1：1混匀。
细胞冻存过程一般为：
1) 消化贴壁细胞或收集悬浮细胞，将细胞悬液收集至离心管中；
2) 1000rpm离心5～10分钟，弃上清液；
3) 用一定量冻存液将细胞重悬，计数，调整细胞密度至106～107个/ml左右；
4) 将细胞悬液分装至2ml冻存管中，每管1～1.5ml；
5) 将冻存管口封，贴上标签，做好记录；
6) 按下列程序降温： 4℃（1～2小时）→－20℃（1～2小时）→－80℃（16～18小时或隔夜）→液氮（LN2）。
【冻存注意事项】：
(1) 细胞应在生长良好、致密度约为80～90％、活力较高（90%以上）的状态下冻存；
(2) 冻存前应检测细胞是否仍具其特有性质，例如杂交瘤细胞应在冻存前1～2日检测产生 抗体的能力；
(3) 所用DMSO应为试剂级等级，以5~10ml小体积无菌分装，4℃避光保存，勿多次解冻；
(4) 细胞的冻存浓度：
正常人类成纤维细胞（normal human fibroblast）：1～3×106 cells/ml ；
贴壁肿瘤细胞（adherent tumor lines）：5～7×106 cells/ml，依细胞种类而异；
杂交瘤细胞（hybridoma）：1～3×106cells/ml，细胞浓度不要太高，某些hybridoma会因冷冻浓度太高而在解冻24小时后死去；
其它悬浮细胞（other suspensions）：5～10×106cells/ml；
细胞的复苏
1) 从液氮罐中取出冻存管，立即放入37℃水浴内，轻晃冻存管使液体尽快融化，通常应在1分钟内融化；
2) 用75%的酒精棉球擦拭冻存管及管盖，将解冻的细胞悬液移至培养瓶（皿）培养或灭菌离心管内离心弃上清去除DMSO后再培养；细胞解冻后是否立即去除冷冻保护剂(DMSO或甘油)，依细胞种类而异，一般而言，大都不需要立即去除冷冻保护剂，无血清培养基冻存的细胞一般解冻后需立即去除冷冻保护剂。
⑴若要立即去除，可将解冻的细胞悬浮液加入含5～10ml培养基的离心管内，离心（800～1000 rpm, 5 分钟），弃去上清液，加入新鲜培养基，混合均匀，置培养箱培养；
⑵若不需立即去除冷冻保存剂，则在解冻培养后次日更换培养基。
细胞的运送
1) 冷冻储存运送
指利用特殊容器内盛液氮或干冰保存运送细胞，效果较好，缺点是比较麻烦，不宜长时间运输，成本较高。
2)充液法
一般选择生长良好的细胞，以汇合1/3～1/2为宜，去掉原培养液，补充新培养液至瓶颈部，保留微量空气，拧紧瓶盖，并用胶带密封，放在用棉花等做防震防压处理的运送盒内。
(1) 运输时间若需4～5天，一般放在贴身口袋即可，到达目的地后倒出多余的培养液，只需保留维持细胞生长所需的培养液置37℃培养，次日传代；
(2) 若仅需数小时运输路程，可将培养瓶的细胞附着面朝上，或把培养液全部倒掉放在贴身口袋运送。
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