下载mp3歌曲:微生物的接种

　　要开展微生物的培养观察活动，就必须有菌种。对初次接触微生物的中学生来说，菌种可以从科研部门、生产单位得到。然而，要想将所得到菌种进行培养和长期保留，就必须学会接种技术，以使菌种能够“传宗接代”。

一、接种的前提条件

　　要保证接种成功，必须具备两个前提条件。一是要使接种能在无菌的环境中进行，即须在灭过菌的无菌室或接种箱中进行；而且操作者必须用肥皂洗手，须穿着干净整洁的衣服，最好配戴口罩；接种用的各种用具也应经过灭菌。二是要使被接种的培养基完全无菌，即必须将培养基灭菌后方能用于接种。

二、接种方法

　　微生物的接种方法很多，往往因实验目的不同而有不同的接种方法，如斜面接种法、液体接种法、由液体培养基接种到液体培养基法、以及穿刺接种法等，其中以斜面接种法最为常用。

1. 斜面接种法

　　将微生物从一个斜面培养基接种至另一个斜面培养基上的方法，称为斜面接种法（图 9 － 5 ）。其方法步骤如下：

　　首先，点燃酒精灯。将菌种和斜面培养基的两只试管平行放在左手上，用拇指与其它四指夹住，并使中指位于两试管之间，两试管的管口齐平（图 9 － 5 ①）。

　　其次，用右手先将棉塞拧转松动，并稍拉出一些，以利接种时拔出（图 9 － 5 ②）。

　　第三，右手持接种针，在酒精灯将针头部分烧红灭菌（图 9-5 ③）。针头以上凡是接种时可能进入试管的部分，均应用火灼烧。

　　以下操作都要使试管口靠近火旁。

　　第四，用右手的小指与掌间拔掉左手上两只试管上的棉塞，同时迅速将试管口在酒精灯上烧灼 3 秒钟左右，使管口上可能沾染的少量杂菌得以烧死（图 9 － 5 ④）。

　　第五，将烧过的接种针伸入菌种管内，先将针头接触培养基上没有菌的部位（如斜面的顶端），使其冷却，以免烫死被接种的菌体。然后轻轻接触菌体，取出少许，慢慢将接种针抽出试管，接种针抽出时不要使针头部分碰到管壁和管口，取出后，不可使针头通过火焰，更不可触及其它无关物品或桌面（图 9-5 ⑤）。

　　第六，迅速将接种针伸进另一试管，在培养基上轻轻划线，接种菌体于其上。划线时，要由底部起划较密的平行线，一直划到顶部，以充分利用斜面面积，但不要将培养基划破（图 9 － 5 ⑥）。

　　第七，烧灼试管口，将棉塞塞上。塞棉塞时，不要移动试管迎接棉塞，以免试管在移动中纳入可能含菌的空气（图 9 － 5 ⑦）。

　　第八，将针头在火焰上烧灼灭菌。放回原处后，腾出手将棉塞塞紧（图 9 － 5 ⑧）。

2. 液体接种法

　　是一种由斜面菌种接种到液体培养基中的方法。

　　接种方法与斜面接种法相同，但手持试管时，应使试管略向上斜，以免培养基流出。

　　将带有菌种的接种针送入液体培养基时，可使针头部分在液体表面与管壁接触的部位轻轻摩擦。接种后，塞上棉塞，烧灼接种针。最后将试管在手掌上轻轻打动，使菌体在培养基中均匀散开。

3. 由液体培养基接种到液体培养基法

　　由于菌种是液体，常应用移液管或无菌滴管接种。无菌操作的注意事项与液体接种法相同，只是移液管、滴管不能在火上烧灼，而要预先经过灭菌。

4. 穿刺接种法

　　是一种由斜面菌种接种到固体深层培养基的方法。

一、结晶紫染色液

甲液

结晶紫（含染料 85% ） 3 克

95% 酒精 20 毫升

乙液

草酸铵 0.8 克

蒸馏水 80 毫升

将甲、乙两液混合，稀释 10 倍，装入不透气的暗色瓶内，静置 48 小时后使用。

二、碘液

碘 1 克

碘化钾 2 克

蒸馏水 300 毫升

将碘化钾溶于 5 ～ 10 毫升水中，再加入碘 1 克，使其溶解后，加水至 300 毫升。

三、番红染色液（用于革兰氏染色法）

2.5% 番红酒精液 10 毫升

蒸馏水 100 毫升

混合，过滤（ 2.5% 番红酒精液系由 2.5 克番红溶于 100 毫升 95% 酒精中而成）。

四、美蓝染色液

美蓝酒精饱和液 30 毫升

1/10000 氢氧化钾水溶液 100 毫升

将以上两液混合，摇匀，过滤（美蓝酒精饱和液系由 5 克美蓝溶于 100 毫升 95% 酒精中而成， 1/10000 氢氧化钾液系由 1 毫升 1% 氢氧化钾加入 99 毫升蒸馏水而成）。

五、孔雀绿染色液

孔雀绿（含 90% 染料） 5 克

蒸馏水 100 毫升

将孔雀绿溶于少量蒸馏水，最后稀释至 100 毫升，静置半小时后过滤。

六、番红水溶液（用于芽孢染色法）

番红（含染料 95% ） 0.5 克

蒸馏水 100 毫升

七、乳酸石炭酸溶液（用于观察霉菌形态）

石炭酸 20 克

乳酸（比重 1.2 ） 20 克

甘油（比重 1.25 ） 40 克

蒸馏水 20 毫升

配制时，先将固体酚加热熔化，倒入水中，然后再慢慢加入乳酸和甘油。

八、 5% 石炭酸

石炭酸 10 毫升

蒸馏水 190 毫升

将固体酚连同容器放在 50 ℃左右的热水中使其熔化，用量筒取 10 毫升，用蒸馏水稀释为 200 毫升即成。

九、 2% 来苏儿

50% 来苏儿 2 毫升

蒸馏水 48 毫升

混合均匀。